Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中迅速扩展

从第一次注意到口内自身抗躯到注意到1改型冠心病流行病学呕吐的令人满意率在孩童时期就有良好的揭示，多个口内自身抗躯阴性的孩童早先有70%在小鼠变换后10将近入院冠心病，而随访15年的孩童这一数量提高到84%。相对之下，占到流行病学1改型冠心病一半以上的改型1改型冠心病的患病机制还没有获取前提的研究者。

越来越多的人开始运用于仍须系统来定义1改型冠心病的令人满意：个躯在注意到多种口内自身抗躯时进入第1过渡阶段，注意到血糖异常时进入第2过渡阶段，注意到呕吐时进入第3过渡阶段。一些多发口内自身抗躯阴性的个躯，在1期和2期，令人满意较快，并持续发展为患病的1改型冠心病。我们早先揭示了一三组在首次侦测到多种口内自身抗躯比对后至少10年无冠心病的总括快令人满意者，这三组病变人数少，但特征相当明确。随后，我们发现口内自身抗原甲基化CD8+T细胞膜重排在令人满意快速的病变早先必需不实际上，但在近期患病和长期实际上的冠心病病变早先很容易侦测到。这或许确实，与令人满意病变相对，这些病变致病重排的调控增强。

最初研究者确实，尽管调控性T细胞膜(Treg)数量但会，但冠心病病变实际上一些动态缺陷，其早先最主要对IL-2的重排能够减缓。此外，冠心病病变早先的效应将CD4+T细胞膜或许对调控更具抵抗性，乏善可陈为效应将T细胞膜的诱发弱化，自然诱发的Treg和躯外诱发的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞膜早先IL-2重排弱化。本研究者的用意是揭示了CD4+调控性T细胞膜(Treg)在领头总括快速令人满意者早先的特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以小团体为了将的纵向研究者，在21岁以下发病的病变亲属早先检查1改型冠心病的危险因素。我们早先揭示了长期快速令人满意者的特征，他们保持多重口内自身抗躯阴性超过10年，但没有注意到冠心病的流行病学呕吐，快性或非开展性致病。随后，10名继续保持无冠心病并愿意提供者大量体内比对的快速令人满意者纳入T和B细胞膜动态系统性。在目前为止的研究者早先，8名快令人满意者(SP三组)，早先位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身抗躯阴性。所有的大多数人都东南面1改型冠心病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了口内自身抗躯对某些抗原的阴性重排，然而，一名病变早先东南面2期至少6年，但没有注意到流行病学呕吐，一名病变被病因为冠心病，该受试者72岁，在野外实验室比对时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性早先对该供躯开展了之外评估。剥离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多模板流式细胞膜拳法和T细胞膜诱发试验评估供躯早先Treg的频率、表改型和动态。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类比对、表征和回归)开展无指导聚类系统性，评估Treg表改型。

结果：与健康供躯相对，来自快令人满意躯的心灵CD4+T细胞膜的指导聚类说明了，激来时的心灵CD4+ Treg频率提高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表示提高有关。一名HbA1c增高的病变与令人满意快速者和也就是说的印证三组相对，Treg明人有所不同。动态系统性确实，与健康供躯相对，来自快速令人满意躯的Treg细胞膜内的CD4+效应将T细胞膜诱发相对来说损毁。乏善可陈为对效应将CD4+T细胞膜CD25和CD134表示的诱发提高。

左图1 深入的表改型系统性说明了，CD4+Treg亚改型在快令人满意队列早先提高。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有供躯的来时CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标有物表示比对出10个元簇:心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标有作用于的10个元簇的MST。每个终端亦然一个坦克部队(100个坦克部队)，巨大的元坦克部队(10个元坦克部队)在终端三组外围上色。每个终端早先的糕点左图指出单个标有的表示级别。(b)每个元聚类的热左图，以说明了全面性标有表示。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)作用于左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对稀土元素为每个metacluster装入支线左图(稀土元素> 0.05%)确认为HD和SP三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞膜(l)。紫色白点亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检查和。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 运用于CITRUS的预测模改型确认，Treg频率的提高是令人满意快速的标志。分级介导(a - f)和棉花系统性(g-k)比较SP大多数人和也就是说的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的亦然性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表示开展剥离，精心设计FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(星点)三组以及供躯SP 606(紫色)早先CD25+ cd127的频率汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导子集的装入支线左图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示准确度后处理，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列之间的不同。(j)装入支线左图说明了了在SP(星点)和HD(灰点)三组早先，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对稀土元素(数量)。(k)直方左图说明了每个簇的表改型(红色)和Treg标有相对表示与故事情节表示(紫色);上列，缓存Treg_3;上面一行，缓存Treg_4。故事情节与所有其他簇早先标有的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检查和

左图3 与健康献血者相对，令人满意快速者心灵treg的GITR提高。每个心灵CD4+T细胞膜元簇(心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个表示标有的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表示热左图(sp606不最主要在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇早先所有HD(黄色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表示串联，说明了直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对下标秩和检查和，p< 0.07(紫色)所有供躯最主要，p< 0.05(紫色)供躯SP 606和也就是说的HD不最主要在测试早先。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs早先GITR表示，从分级介导，从所有HD(黄色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)串联，说明了直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对下标秩检查和

左图4 来自快速令人满意的CD4+ treg细胞膜控制效应将CD4+T细胞膜的能够减缓。SP三组用紫色的支线和白点指出，HD三组用白色的支线和白点指出，紫色的支线/白点指出供躯sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜开展分选。CD4+CD25−(接收者者)被标有为CFSE, Treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠来时化细胞膜，培训3天后开展流式细胞膜拳法侦测。(a-d)与CD4+接收者者相对应将的treg培训(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培训。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE诱发%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发%-。运用于阴性印证(激来时的叛离细胞膜不含treg)计算诱发%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 效应将CD4+T细胞膜对快速令人满意的T细胞膜来时化的诱发更敏感。SP三组用紫色的支线和白点指出，HD三组用白色的支线和白点指出，紫色的支线/白点指出供躯sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜开展分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标有，treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠来时化细胞膜，培训3天后开展流式细胞膜拳法(CD25反染)和细胞膜因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培训。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE诱发百分率(b)。(c,d) CD25诱发百分率(c)和CD134诱发百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训早先的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自快速令人满意子的来时化心灵CD4+Treg在GITR表示早先获取了扩展和丰富，凸显了进一步研究者Treg在1改型冠心病几率个躯早先的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28