Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型式糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现人棒状内自身HIV到再次出现1M-肾病药理学患者的方面率在成人时期就有比较好的说明了，多个人棒状内自身HIV中都性的成人中都有70%在血清转换后10短期内患上肾病，而随访15年的成人这一比例减小到84%。相相当之下，占药理学1M-肾病一半以上的M-1M-肾病的发病选择性还没得到充分的科学研究。

愈发多的人开始常用分期子系统来判别1M-肾病的方面：性状在再次出现多种人棒状内自身HIV时转入第1收尾，再次出现棒状温异常时转入第2收尾，再次出现患者时转入第3收尾。一些多发人棒状内自身HIV中都性的性状，在1期和2期，方面较格外慢，并持续发展为发病的1M-肾病。我们在此之后说明了了一第四组在首次测定到多种人棒状内自身HIV检验后据估计10年无肾病的想像中格外慢方面者，这第四组病变人数少，但相异之处想像中为指明。随后，我们发现人棒状内自身抗原免疫CD8+T蛋白质催化在方面快速的病变中都基本上不假定，但在现阶段发病和依然假定的肾病病变中都很较难测定到。这可能表明，与方面病变相相当，这些病变化脓性催化的调控增强。

早期科学研究表明，尽管调控性T蛋白质(Treg)数量正常，但肾病病变假定一些功能缺陷，其中都包括对IL-2的催化能够降低。此外，肾病病变中都的effectCD4+T蛋白质可能对调控格外具抵抗性，表现为effectT蛋白质的依赖性减弱，自然产生的Treg和胃产生的作用于Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白质中都IL-2催化减弱。本科学研究的目地是说明了了CD4+调控性T蛋白质(Treg)在一小群想像中快速方面者中都的相异之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以成年人结合的纵向科学研究，在21岁以下确诊的病变亲属中都测定1M-肾病的脆弱因素。我们在此之后说明了了依然快速方面者的相异之处，他们保证多重人棒状内自身HIV中都性超过10年，但没再次出现肾病的药理学患者，格外慢性或非顺利进行性化脓性。随后，10名继续保证无肾病并主动提供大量血液检验的快速方面者扩及T和B蛋白质功能统计分析。在目前的科学研究中都，8名格外慢方面者(SP第四组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的人棒状内自身HIV中都性。所有的自发性都正处于1M-肾病方面的1期，尽管一些人随后失掉了人棒状内自身HIV对某些抗原的中都性催化，然而，一名病变在此之后正处于2期据估计6年，但没再次出现药理学患者，一名病变被诊断为肾病，该受试者72岁，在搜集物理检验时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中都对该NADPH顺利进行了基本上上评估。分离外周血单个质子蛋白质(PBMCs)，采用多参数流式蛋白质术和T蛋白质依赖性试验评估NADPH中都Treg的Hz、表M-和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接著)顺利进行无监督聚类统计分析，评估Treg表M-。

结果：与肥胖NADPH相相当，来自格外慢方面棒状的失忆CD4+T蛋白质的监督聚类推断，作用于的失忆CD4+ TregHz减小，与糖皮质激素作用于的TNFR相关蛋白(GITR)解读减小有关。一名HbA1c升高的病变与方面快速者和匹配的相相当较第四组相相当，Treg明人相同。功能统计分析表明，与肥胖NADPH相相当，来自快速方面棒状的Treg介导的CD4+effectT蛋白质依赖性显着受损。表现为对effectCD4+T蛋白质CD25和CD134解读的依赖性减小。

布1 深入的表M-统计分析推断，CD4+Treg亚M-在格外慢方面队列中都减小。由FlowSOM生成的Treg室，周围在来自所有NADPH的活着CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标上物解读鉴定出10个元簇:失忆T蛋白质_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T蛋白质;HLA-DR + GITR +失忆T蛋白质;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)常用9个相异Treg标上生成的10个元簇的MST。每个结点代表者一个一个大(100个一个大)，格外多的元一个大(10个元一个大)在结点第四组周围打磨。每个结点中都的饼布表示单个标上的解读级别。(b)每个元聚类的热布，以推断整棒状标上解读。(c, d)为HD第四组(c)和SP第四组(d)生成布，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较数量级为每个metacluster装入支线布(数量级> 0.05%)指明为HD和SP第四组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T蛋白质(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T蛋白质(l)。浅蓝色左上方代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 常用CITRUS的预测模M-给出结论，TregHz的减小是方面快速的标志。AO离子通道(a - f)和柑桔统计分析(g-k)相当SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的代表者性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利进行分离，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(白点)第四组以及NADPHSP 606(浅蓝色)中都CD25+ cd127的Hz概述布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道子集的装入支线布;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度可视，交叉凸显的簇被标识为SP和HD队列相互间的相异。(j)装入支线布推断了在SP(白点)和HD(灰点)第四组中都，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的比较数量级(比例)。(k)直方布推断每个簇的表M-(红色)和Treg标上比较解读与文化背景解读(蓝色);上列，寄存器Treg_3;后面偷偷地，寄存器Treg_4。文化背景与所有其他簇中都标上的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

布3 与肥胖献血者相相当，方面快速者失忆treg的GITR减小。每个失忆CD4+T蛋白质元簇(失忆T蛋白质_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T蛋白质;HLA-DR + GITR +失忆T蛋白质;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个解读标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热布(sp606不包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR解读串接，推断直方布(c)和概述布(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有NADPH包括，p< 0.05(蓝色)NADPHSP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR解读，从AO离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)串接，推断直方布(e)和概述布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

布4 来自快速方面的CD4+ treg蛋白质支配effectCD4+T蛋白质的能够降低。SP第四组用蓝色的支线和左上方表示，HD第四组用黑色的支线和左上方表示，浅蓝色的支线/左上方表示NADPHsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标上为CFSE, Treg按判读的比例氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生蛋白质，指导3翌日顺利进行流式蛋白质术测定。(a-d)与CD4+需要的话者比较应的treg指导(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者指导。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE依赖性平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性平均值。常用中都性相相当较(作用于的响应蛋白质不含treg)计算依赖性平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

布5 effectCD4+T蛋白质对快速方面的T蛋白质再生的依赖性格外敏感。SP第四组用蓝色的支线和左上方表示，HD第四组用黑色的支线和左上方表示，浅蓝色的支线/左上方表示NADPHsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标上，treg按判读的比例氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生蛋白质，指导3翌日顺利进行流式蛋白质术(CD25反染)和蛋白质因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同完成指导。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE依赖性%-(b)。(c,d) CD25依赖性%-(c)和CD134依赖性%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中都的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

结论：我们给出的结论是，来自快速方面子的再生失忆CD4+Treg在GITR解读中都得到了扩大和充沛，强调了进一步科学研究Treg在1M-肾病风险性状中都的一般而言的合理性。

原文典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28